南宫28NG相信品牌力量推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，具备以下显著特点:

产品特点

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
2. 引物等组分经过优化，灵敏度高。
3. 提供阳性对照，便于有效区分假阴性样品。
4. 高特异性，引物根据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域设计，避免与其他生物样本DNA发生交叉反应。
5. 适用于定性和定量检测，定量检测的线性范围至少为5个数量级。
6. 本产品可满足50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应需求。
7. 本产品仅供科研使用。

操作方法

一、DNA提取（样本制备区）

采用用户自选的方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

注意：阳性对照浓度较高，故稀释操作应在独立区域进行，以避免污染。
1. 标记6个离心管，分别为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O（建议使用带芯枪头）。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品。
4. 更换枪头后，在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品。
5. 重复该步骤，直到获得6个浓度的标准曲线样品。如果不需要制作标准曲线，只需将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

针对N个待检样品，准备N+2个qPCR管（包含N个待检样品、1个阴性对照和6个阳性对照），向各PCR管中加入各自所需的成分（详细说明可索取）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中添加2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入PCR扩增仪器的样品槽中进行扩增，具体扩增程序请参考详细说明书。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，则阳性对照的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线；根据待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，进而计算其浓度。
2. 如果未制作标准曲线，根据以下标准判定结果：阳性对照Ct值<30，呈现明显的指数增长且为典型的S型曲线；阴性对照Ct值为38或无Ct值，未显现明显的指数增长。样本检测：如果Ct值<35，表明样本中检测出婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值在35-38之间需复检，如结果依然在此范围且有指数增长可判定为阳性，反之则为阴性。

运输与保存

本产品需低温运输，保存于-20℃，存储期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。

南宫28NG相信品牌力量，助力您的科研工作，提供高质量的检测试剂盒满足您的需求。