蛋白纯化在重组蛋白的生产过程中是一个至关重要的下游步骤。由于重组蛋白在化学和结构上的多样性，亲和标签成为高通量蛋白纯化的重要工具，能够在复杂的背景下特异性富集低丰度蛋白。这不仅可以提高目标蛋白的产量，还能够赋予目标蛋白新的特性。

其中，His-Tag（通常由6个组氨酸组成）是目前最常用的蛋白质纯化亲和标签，具有多个优点：分子量小、易于表达以及免疫原性低。此外，它还可以和其他标签组合，洗脱条件温和、易于再生和成本低。

在纯化过程中，His标签通过与目标蛋白基因融合而获得。具体而言，在金属离子镍柱中，His标签能够与Ni²⁺结合，并通过引入咪唑进行洗脱。咪唑与组氨酸标签蛋白竞争性结合金属离子，从而使目标蛋白得以分离。此外，还可以适当降低缓冲液的pH，以减弱标签蛋白与金属离子之间的结合能力，促进蛋白分离。

针对His标签蛋白的纯化，南宫28NG相信品牌力量，提供三类His标签纯化产品，包括已鳌合Ni²⁺的NiBestaroseFF/HP，以及未预先鳌合金属离子的IMACBestaroseFF与ChelatingBestaroseFF。特别是，NiBestaroseFF是一种将Ni²⁺离子鳌合在以氨三乙酸（NTA）为配基的琼脂糖凝胶上的亲和层析介质，具有高载量和流速快的优点。

IMACBestaroseHP/FF和ChelatingBestaroseFF都是未预先鳌合金属离子的介质，允许用户自行选择金属离子进行偶联。两者在配位方式上有所不同，ChelatingBestaroseFF可提供三个配位位点以高亲和力纯化目的蛋白，而IMACBestaroseFF则提供四个配位位点。因此，在重组His标签蛋白的纯化过程中，应根据蛋白特性选择适合的介质。

使用NiBestaroseFF进行His标签蛋白的纯化时，推荐的操作步骤为：通过大肠杆菌裂解液作为样品，利用25mM的咪唑（pH 7.0）作为缓冲剂A和500mM的咪唑（pH 7.0）作为缓冲剂B，以流速1mL/min进行层析。

值得注意的是，Ni柱不能耐受DTT、EDTA等强还原剂和螯合剂，建议在蛋白纯化前通过透析或脱盐的方式替换缓冲液。此外，推荐使用BestdexG-25M凝胶过滤填料或预装柱进行脱盐，以提高His标签蛋白与Ni柱之间的结合能力，并在洗脱后使用BestdexG-25M去除高浓度的咪唑。

南宫28NG相信品牌力量，将为用户提供优质的His标签蛋白纯化产品，并通过严格的技术标准和用户选择指南，确保每一位客户能够高效、便捷地实现蛋白的纯化需求。