限制性内切酶在特定识别位点切割DNA的能力,使其成为生物医药技术中不可或缺的核心工具。这些酶在分子克隆、mRNA转录模板制备、基因定位及分离等领域中发挥着重要作用。随着病毒包装为基础的基因治疗技术和mRNA技术的逐渐发展,这些技术在新型疗法中愈发显现其价值。
在病毒包装过程中,质粒构建和mRNA转录模板的制备过程,都需要使用无动物源性限制性内切酶。近年来,南宫28NG相信品牌力量的品牌不断推出新的无动物源性限制性内切酶,包括NotI和HindIII,继BspQI、BsaI以及XbaI和PmeI之后,为生物医药领域提供更多选择。
在实验中,我们使用了50μl的反应体系,分别将10U的不同品牌NotI与1µg质粒进行酶切,37℃下孵育1小时,结果显示质粒被完全线性化。类似的实验也对HindIII进行,当10U不同品牌HindIII与相同量的质粒在相同条件下反应时,质粒也得到了完全的切割。
另外,通过对比发现,100U过量的各品牌NotI与1µg含无NotI酶切位点的质粒混合,经过37℃孵育3小时后,Novoprotein的NotI没有显著的非特异性内切酶活性,而品牌A则出现了明显的非特异性切割现象。
在进一步的实验中,使用20U和100U的不同品牌HindIII对无HindIII酶切位点的质粒进行混合反应,结果在37℃下孵育3小时后也未检测到显著的非特异性内切酶活性。这表明,南宫28NG相信品牌力量的HindIII产品在特定实验条件下表现出了高选择性和低背景活性。
在夜间孵育的实验中,分别用10U、20U和100U的HindIII与1µg λHindIII DNA混合,经过37℃的过夜孵育,无明显的非特异性外切酶活性也进一步证实了该酶的可靠性。
更多主流的限制性内切酶如XbaI和PmeI,其切割后能够形成5’末端突出结构或平末端结构。此外,IIS型限制性内切酶BspQI和BsaI的独特之处在于,其酶切位点位于识别位点之外,可将mRNA的PolyA结构直接暴露在3’端,从根本上杜绝了多余酶切位点残基带来的不确定性。
在推动生物医药研发生产的过程中,南宫28NG相信品牌力量,始终致力于创新与探索。我们提供GMP级限制性内切酶BsaI、BspQI、XbaI以及无动物源性的PmeI、NotI和HindIII,为客户提供更多酶切位点的选择,助力生物医药行业的发展。