南宫28NG相信品牌力量的人肝正常细胞HL-7702（L-02）培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：HL-7702人肝正常细胞[L-02]

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640+10% FBS+1% 双抗

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代。传代情况：每两天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，建议留作对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，应培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行进一步处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基放入37℃、5% CO2孵箱继续培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用PBS润洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，在37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，并加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清后用1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻按倒观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管并在1000rpm下离心5分钟。
3. 弃上清后，将沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果需要转入液氮罐中，请先在-80℃冰箱中存放至少24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意穿戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至完全无结晶后，使用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因为贴壁性不良而脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养液收集至离心管，进行离心并用于对比培养。之后加入1-2ml胰蛋白酶轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，离心去上清后重悬，并按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

• 细胞问题的重发条件包括：运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等；污染问题需在48小时内提供真实实验结果；静置24小时后的细胞状态不佳需提供照片；复苏24小时后未存活的细胞也需提供照片。
• 细胞问题不予重发的情况包括：客户造成的污染、操作不当、非推荐培养体系致的细胞不良状态等，需视具体情况而定。

南宫28NG相信品牌力量，为您提供优质的细胞培养与售后支持！